Linbio Fast Endo-Free Plasmid Mini Extraction Kit (Linbio无内毒素小提试剂盒)
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产品简介
Linbio Fast Endo-Free Plasmid Mini Extraction Kit是一种用于小量无内毒素质粒快速抽提的离心柱式试剂盒。采用了先进的内毒素吸附缓冲液(Binding Solution)，能有效去除质粒中的内毒素污染，纯化的质粒中内毒素含量远小于0.1EU/µg，可大大提高转染实验效率和动物注射效果。本试剂盒无需使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，无需乙醇沉淀，操作时间短，可在30-60 min之内完成。提取的质粒内毒素含量极低且纯净度高，可直接用于转染、酶切、PCR、转化、测序等各种实验。
储存条件
RNase，-20℃保存；
其他组分，室温（15-25℃）保存。 -
使用说明书：下载
产品组成
名称
Linbio Fast Endo-Free Plasmid Mini Extraction Kit
组分
LN100501
LN100502
储存条件
Solution I
15 ml
30 ml
15-25℃
Solution II
15 ml
30 ml
15-25℃
Solution III
15 ml
30 ml
15-25℃
Binding Solution
40 ml
80 ml
15-25℃
Wash Buffer I
30 ml
60 ml
15-25℃
Wash Buffer II
22.5 ml (第一次使用前需加入7.5 ml异丙醇)
45ml (第一次使用前需加入15 ml异丙醇)
15-25℃
Wash Buffer III
18 ml（第一次使用前需加入72 ml无水
乙醇）
36 ml（第一次使用前需加入144 ml无水
乙醇）
15-25℃
Elution Buffer
5 ml
10 ml
15-25℃
RNase
150 µl
300 µl
-20℃
小提质粒纯化柱及废液收集管
50套
100套
15-25℃
使用说明
1. 取1-5 ml过夜培养的菌液，10 ,000 rpm 离心1 min，尽量吸净培养基；LinbioNote：菌液较多时可以通过多次离心收集。
2. 加入250 µl Solution I，充分重悬细菌沉淀；LinbioNote：（a）Solution I在首次使用前须按照瓶子标签所示加入RNase，混匀后使用；（b）如重悬不充分会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3. 加入250 µl Solution II，轻柔地上下翻转10-12次以混匀，孵育2-3min，使菌体充分裂解；LinbioNote：（a）切勿剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒被基因组DNA污染；（b）孵育时间不要超过5min；（c）如已裂解充分，打开EP管盖时会呈现拉丝状。
4. 加入250 µl Solution III，轻柔地上下翻转10-12次以混匀，此时将出现白色絮状沉淀，12,000 rpm，离心10 min；
5. 将上清液转移至新的EP管中，加入与上清等体积的Binding Solution，轻柔地上下翻转10-12次以混匀，室温放置 10min；
6. 将上清液转移至吸附柱中，12,000 rpm，离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液；LinbioNote：吸附柱单次最大容量为 700 µl，如果溶液总体积超出 700 µl，可按上述步骤多次收集。
7.向吸附柱中加入500 µl Wash Buffer I，12,000 rpm，离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液；
8. 向吸附柱中加入500 µl Wash Buffer II，12,000 rpm，离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液；LinbioNote：Wash Buffer II在首次使用前须按照瓶子标签所示加入异丙醇，混匀后使用；
9. 向吸附柱中加入700 µl Wash Buffer III，12,000 rpm，离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液；LinbioNote：Wash Buffer III在首次使用前须按照瓶子标签所示加入无水乙醇，混匀后使用；
10. 重复步骤9；
11. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm，离心2 min，去除吸附柱中残余的Wash Buffer III；
12. 将吸附柱放到一个干净1.5 ml离心管中，向吸附柱中间位置滴加30-100 μl Elution Buffer，室温放置1 min，12,000 rpm，离心
1 min收集DNA溶液；LinbioNote：为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min收集DNA溶液。
注意事项
1. 首次使用前请短暂离心RNase A，按试剂瓶标签提示将RNase加入Solution I 中，于2-8℃保存。
2. 首次使用Wash Buffer II前按试剂瓶标签提示加入异丙醇，于室温保存。
3. 首次使用Wash Buffer III前按试剂瓶标签提示加入无水乙醇，于室温保存。
4. 温度较低时，Solution II 可能会有沉淀产生，如有沉淀，37℃水浴加热溶解混匀后使用。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
常见问题及解决方法
Q1. 低产量或无 DNA
a. 培养的细菌没有转化相应的质粒 DNA 或细菌培养条件不正确。挑选确定含有转化质粒 DNA 的细菌进行培养，并确认细菌培养条件。
b. 细菌保存时间过长。细菌在甘油冻存液中保存时间较长，常会出现质粒丢失的现象，可以重新划平板，挑取含质粒的单菌落或重新转化。
c. Solution II 出现沉淀。置于 37℃溶解，混匀后再使用。
d. Wash Buffer II或Wash Buffer III没有添加异丙醇或无水乙醇。确认是否添加正确体积的异丙醇或无水乙醇。
Q2. 质粒 DNA 污染
a. 加入Solution II 后剧烈震荡导致基因组DNA降解。加入Solution II 后轻柔混匀，不可剧烈震荡或使用涡旋仪。
b. 裂解时间过长。Solution II 加入后立即混匀，裂解时间不要超过5 min。
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