Linbio Plasmid Mini Extraction Kit (质粒小提试剂盒)
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产品简介
Linbio Plasmid Mini Extraction Kit是一种用于小量质粒快速抽提的离心柱式试剂盒。采用了改进的 SDS 碱裂解法，结合高质量离心吸附柱，达到快速提取质粒 DNA的目的。本试剂盒无需使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，无需乙醇沉淀，操作时间短，可在30 min之内完成。提取的质粒纯净度高，可直接用于酶切、PCR、转化、测序等各种实验。
储存条件
RNase A，-20℃保存；
其他组分，室温（15-25℃）保存。 -
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产品信息
货号
名称
规格
LN100901
Linbio Plasmid Mini Extraction Kit (质粒小提试剂盒)
100 T
LN100902
Linbio Plasmid Mini Extraction Kit (质粒小提试剂盒)
200 T
产品组成
组分
LN100901
LN100902
储存条件
Solution I
30 ml
60 ml
15-25℃
Solution II
30 ml
60 ml
15-25℃
Solution III
40 ml
80 ml
15-25℃
Wash Buffer I
36ml (第一次使用前需加入24 ml异丙醇)
72 ml (第一次使用前需加入48 ml异丙醇)
15-25℃
Wash Buffer II
40 ml（第一次使用前需加入160 ml无水
乙醇）
80 ml（第一次使用前需加入320 ml无水
乙醇）
15-25℃
Elution Buffer
20 ml
40 ml
15-25℃
RNase A
300 μl
600 μl
-20℃
小提质粒纯化柱及废液收集管
100套
200套
15-25℃
使用说明
1. 取1-5 ml过夜培养的菌液，10 ,000 rpm 离心1 min，尽量吸净培养基；LinbioNote：菌液较多时可以通过多次离心收集。
2. 加入250 μl Solution I，充分重悬细菌沉淀；LinbioNote：（a）Solution I在首次使用前须按照瓶子标签所示加入RNase A，混匀后使用，每次使用后置于 4℃保存；（b）如重悬不充分会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3. 加入250 μl Solution II，轻柔地上下翻转10-12次以混匀，孵育2-3 min，使菌体充分裂解；LinbioNote：（a）切勿剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒被基因组DNA污染；（b）孵育时间不要超过5 min；（c）如已裂解充分，打开EP管盖时会呈现拉丝状。
4. 加入350 μl Solution III，轻柔地上下翻转10-12次以混匀，此时将出现白色絮状沉淀，12,000 rpm，离心10 min；
5. 将上清液转移至吸附柱中，12,000 rpm，离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液；LinbioNote：避免吸取白色沉淀。
6. 向吸附柱中加入500 μl Wash Buffer I，12,000 rpm，离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液；LinbioNote：Wash Buffer I在首次使用前须按照瓶子标签所示加入异丙醇，混匀后使用。
7. 向吸附柱中加入750 μl Wash Buffer II，12,000 rpm，离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液；LinbioNote：（a）Wash Buffer II在首次使用前须按照瓶子标签所示加入无水乙醇，混匀后使用。
8.（可选）弃去滤液，重复第7步骤一次；
9. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm，离心2 min，去除吸附柱中残余的Wash Buffer II；
10. 将吸附柱放到一个干净1.5 ml离心管中，向吸附柱中间位置滴加30-100 μl Elution Buffer，室温放置1 min，12,000 rpm，离心1 min收集DNA溶液。LinbioNote：为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min收集DNA溶液。
注意事项
1. 首次使用前请短暂离心RNase A，按试剂瓶标签提示将RNase加入Solution I中，于4℃保存。
2. 首次使用Wash Buffer I前按试剂瓶标签提示加入异丙醇，于室温保存。
3. 首次使用Wash Buffer II前按试剂瓶标签提示加入无水乙醇，于室温保存。
4. 温度较低时，Solution II可能会有沉淀产生，如有沉淀，37℃水浴加热溶解混匀后使用。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
常见问题及解决方法
Q1. 低产量或无 DNA
a. 培养的细菌没有转化相应的质粒 DNA 或细菌培养条件不正确。挑选确定含有转化质粒 DNA 的细菌进行培养，并确认细菌培养条件。
b. 细菌保存时间过长。细菌在甘油冻存液中保存时间较长，常会出现质粒丢失的现象，可以重新划平板，挑取含质粒的单菌落或重新转化。
c. Solution II 出现沉淀。置于 37℃溶解，混匀后再使用。
d. Wash Buffer I或Wash Buffer II没有添加异丙醇或无水乙醇。确认是否添加正确体积的异丙醇或无水乙醇。
Q2. 质粒 DNA 污染
a. 加入Solution II后剧烈震荡导致基因组DNA降解。加入Solution II后轻柔混匀，不可剧烈震荡或使用涡旋仪。
b. 裂解时间过长。Solution II 加入后立即混匀，裂解时间不要超过5 min。
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