LinBioFectmine Transfection Reagent（转染试剂）
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产品简介
LinBioFectmine Transfection Reagent是一种高效的阳离子聚合物转染试剂。聚合物分支中带正电荷的基团可以与带负电荷的核酸相互作用，形成稳定的LinBioFectmine-核酸复合物，与细胞表面结合并通过非特异性内吞作用进入细胞。LinBioFectmine转染试剂与脂质体转染试剂相比具有以下优势：（1）达到相同转染效率时细胞毒性更低；（2）转染前无需更换培养基；（3）转染过程中无需使用Opti-MEM等特殊培养基，降低了实验成本；（4）转染操作简单，重复性好。
储存条件： 保存于4℃，不可冷冻。 -
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产品信息
货号
名称
规格
LC300201
LinBioFectmine Transfection Reagent (转染试剂)
0.5 ml
LC300202
LinBioFectmine Transfection Reagent (转染试剂)
1 ml
LC300203
LinBioFectmine Transfection Reagent (转染试剂)
1.5 ml
使用说明
1. 根据下表转染细胞（以24孔板转染EGFP表达质粒为例，其它孔板转染试剂用量可参考表2）。
转染前1天
接种细胞
按900 μl/孔接种细胞，细胞密度控制在培养16-24 h后，即转染前细胞汇合度达60%-80%（1）
转染当天
配制LinBioFectmine-核酸复合物
无血清培养基
99 μl
LinBioFectmine enhancer
1 μl
质粒DNA（2）
1 μg
涡旋振荡/吹打，充分混匀
LinBioFectmine转染试剂
1 μl（优化时可选多个体积）
涡旋振荡/吹打，充分混匀，室温孵育15 min
转染
直接滴加LinBioFectmine-核酸复合物到前一天接种的细胞中
转染后
观察并分析转染细胞
6-8 h后观察转染细胞状态以决定是否需要更换培养基以去除转染复合物（3）
转染后1-3天，分析转染效率（4
LinBioNote：
（1）LinBioFectmine-核酸复合物依靠细胞内吞作用进入细胞，良好的细胞状态是高效转染的必要保证，确保转染前细胞形态良好，细胞汇合度在80%以下。
（2）LinBioFectmine可广泛用于转染包括质粒DNA，siRNA，microRNA等各类型核酸分子，操作方法步骤与转染质粒DNA方法相同，但不同类型核酸分子的LinBioFectmine/核酸比例需根据具体实验情况优化。
（3） 理论上来讲，转染复合物与细胞共孵育时间越长，被转染细胞则越多，但不同细胞对转染试剂的耐受程度不同，需根据具体细胞确定转染时间及是否需要更换培养基以去除转染试剂带来的细胞毒性。
（4）最佳孵育时间，即转染后外源基因表达的高值出现时间，取决于细胞类型、启动子强度和表达产物特性，必须根据具体实验确定。
2. 使用LinBioFectmine转染试剂对贴壁细胞和悬浮细胞的转染用量
细胞培养板
细胞生长底面积(cm2/孔)
细胞培养液体积(mL)
转染前一天接种贴壁（或悬浮）细胞数（1）
稀释用的无血清培养基体积(μl)
LinBioFectmine enhancer的体积(μl)（2）
DNA含量(μg)
LinBioFectmine转染试剂的体积(μl)
推荐 范围
96孔板
0.3
0.2
1.0-1.5×104（2.0×104）
20.0
0.2
0.2
0.3
0.2-0.6
48孔板
0.7
0.5
2.0-4.0×104
（5.0×105）
50.0
0.5
0.5
0.5
0.3-2.0
24孔板
2.0
1.0
6.0-8.0×104
（1.0×105）
100.0
1.0
1.0
1.0
0.5-4.0
12孔板
4.0
2.0
1.2-1.6×105（2.0×105）
200.0
2.0
2.0
2.0
1.0-6.0
6孔板
9.5
4.0
2.4-3.2×105（4.0×105）
400.0
4.0
4.0
4.0
2.0-8.0
60mm皿
20.0
6.0
6.0-8.0×105（1.0×106）
600.0
6.0
6.0
8.0
4.0-16.0
LinBioNote：
（1）转染前一天接种贴壁（或悬浮）细胞数：括号内的值为悬浮细胞数。
（2）LinBioFectmine enhancer的体积应为稀释用的无血清培养基体积的1/100。
数据展示
图A. LinBioFectmine与T公司L试剂用EGFP表达质粒分别转染293T。
图B. LinBioFectmine与T公司L试剂分别转染siRNA的Western-blot 结果。
注意事项
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
常见问题及解决方法
问题
分析
解决方法
转染效率偏低
细胞本身状态不佳
使用适度传代且为对数生长期的细胞
LinBioFectmine浓度太高，造成细胞毒性
降低LinBioFectmine的用量
LinBioFectmine和DNA的比例未优化
预实验，确定LinBioFectmine和DNA的比例
转染体系不对
设立阳性对照，如转染GFP基因，检验转染体系
DNA质量低，有降解或含有内毒素
使用纯化后且OD260/280≥1.8的DNA
LinBioFectmine和LinBioFectmine enhancer未稀释
根据使用说明对转染试剂稀释后加入
转染复合物中含有血清
使用无血清培养基
支原体污染
定期检查细胞中是否有支原体污染
转染后细胞状态差
转染试剂用量偏多，造成细胞毒性
减少转染试剂用量，更换为正常含血清培养基
转染时细胞汇合度偏低
使用对数生长期的细胞，转染时细胞汇合度达60%-80%
DNA未纯化，含有内毒素
使用纯化后且OD260/280≥1.8 的DNA
细胞株对转染试剂较敏感或转染后培养时间过长
加入转染复合物6-8 h后，及时更换培养基
基因的产物毒性
验证基因产物是否有毒
转染复合物加入培养基后分布不均，局部转染复合物浓度过高，细胞毒性偏高
加入转染复合物后，轻晃匀或轻用手指敲孔板一侧使其分布均匀
细胞状态不佳。传代次数太少，细胞未恢复正常状态；或传代次数过多，细胞老化
使用适度传代的细胞，保证使用的细胞状态正常；减少代次差异对实验结果的影响
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