LinBioZol Chloroform-Free RNA Extraction Kit (Linbio无氯仿RNA提取试剂盒)
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产品简介
LinBioZol Chloroform-Free RNA Extraction Kit是一种无需使用氯仿的即用型RNA抽提试剂盒。适用于动植物细胞、组织及细菌的RNA抽提。该试剂可在迅速裂解细胞或组织的同时灭活细胞释放出的核酸酶，保持 RNA 的完整性，提取的RNA无DNA与蛋白污染，可直接用于qPCR、Northern blot、dot blot、cDNA克隆、体外翻译等。
储存条件
4℃保存 -
使用说明书：下载
产品组成
名称
LinBioZol Chloroform-Free RNA Extraction Kit
组分
LN100601
LN100602
储存条件
Lysis Buffer
50 ml
100 ml
4℃
Extraction Buffer
5 ml
10 ml
4℃
RNase-Free Water
5 ml
10 ml
4℃
使用说明
1. 细胞裂解或组织匀浆
a. 贴壁细胞：吸尽培养液，每10 cm2培养面积的细胞加入500 μl Lysis Buffer试剂，使用移液枪吹打，确保细胞全部重悬于Lysis Buffer，然后吸至离心管中；
b. 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽上清，每1×106-1×107个细胞加入500 μl Lysis Buffer，使用移液枪吹打，确保细胞全部重悬于Lysis Buffer中；
LinBioNote：如遇某些细胞（如酵母和革兰氏阳性细菌）裂解不充分，可用匀浆器匀浆处理。
c. 组织：（1）匀浆法：先将组织剪切成小块，每50 mg组织加入500 μl Lysis Buffer后使用匀浆器进行匀浆处理；（2）研磨法：使用液氮将组织进行速冻处理，随即迅速转移至研钵中，加入液氮后研磨，期间可不断加入液氮，直至研磨至粉末状（无明显可见颗粒），将研磨成粉的样品转移至离心管中，按50 mg组织加入500 μl Lysis Buffer试剂。
2. 每500 μl的Lysis Buffer加入50 μl Extraction Buffer，涡旋15 s充分混匀；
3. 12,000 rpm，4 ºC离心15 min；
4. 吸取含RNA的上层无色水相至新离心管中，加入等体积异丙醇，涡旋15 s混匀；
5. 12,000 rpm，4 ºC离心15 min，管底可见RNA沉淀，弃上清；
6. 加入1 ml 70 %乙醇 (DEPC水配制)，颠倒混匀三次，12000 rpm, 4 ºC离心5 min，吸尽上清，置于生物安全柜或超净工作台中挥发残留乙醇；
7. 待RNA略干后呈现透明凝胶状，加入20 μl RNase-free Water溶解，-80 ºC冻存。
LinBioNote：(a)不要过度干燥RNA，否则很难溶解;(b)如发现残留成分对下游实验有影响，可重复步骤6一次。
注意事项
1. 需自备异丙醇、无水乙醇（RNase-free）、70%乙醇（自配）。
2. 所有离心管，枪头及相关溶液都必须无RNase污染，耐高温器物可150 ºC烘烤4 h以去除RNase，其它器物可用0.01 %的DEPC水浸泡过夜，灭菌后烘干。
3. 操作过程中建议戴一次性口罩，勤换手套，以防RNase污染。
4. 避免接触皮肤或吸入，如不慎接触，请立即用大量去垢剂和清水冲洗，如仍有不适，请及时就医。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
常见问题及解决方法
Q1：RNA发生降解
a. 确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase污染。
b. 戴口罩和一次性手套，并在洁净区操作。
c. 针对内源RNase含量高或不易匀浆的组织，可将组织切成小块后立即投入液氮冷冻后进行研磨，整个研磨过程中，样品不得融化。
LinBioNote：RNA也可能在电泳过程中发生降解，推荐使用RNA专用上样缓冲液及电泳缓冲液以避免此问题。
Q2：样品中杂质较多
a. 对于某些蛋白，多糖或脂肪含量较高的细胞或组织，Lysis Buffer裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物，可12,000 rpm，4ºC离心15 min，吸取上清至新的离心管中，加入氯仿混匀后进行下一步操作。
Q3: 提取的RNA有基因组污染
a. 吸取含RNA的上层无色水相时，应避免吸到中间层和下层液体。
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