2×Taq酶预混液
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LinBio Taq Master Mix是一种包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、反应缓冲液和稳定剂组成的2倍即用型预混液。使用时仅需加入DNA模板和引物即可进行扩增，大大简化了操作步骤，提高了结果的重现性。具有快速简便、特异性强、灵敏度高等优点。本产品含有红色染料，PCR产物无需再添加上样缓冲液，可直接进行电泳。PCR产物的3’端带A，可直接用于TA克隆。
储存条件： -20℃保存 -
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产品信息
货号
名称
规格
LN100115
2×LinBio Taq Master Mix(Dye Plus) (2×Taq预混液)
15×1 ml
LN100150
2×LinBio Taq Master Mix(Dye Plus) (2×Taq预混液)
50×1 ml
产品组成
名称
2×LinBio Taq Master Mix(Dye Plus)
组分
LN100101
LN100105
LN100115
LN100150
储存条件
2×LinBio Taq Master Mix(Dye Plus)
1 ml
5×1 ml
15×1 ml
50×1 ml
-20℃
ddH2O
1 ml
5×1 ml
15×1 ml
50×1 ml
-20℃
使用说明
1. 将2×LinBio Taq Master Mix(Dye Plus)置于冰上溶解，溶解后上下轻轻颠倒混匀，并短暂离心。
2×LinBio Taq Master Mix(Dye Plus)
25 μl
Primer 1(10 μM)
2 μl
Primer 2(10 μM)
2 μl
Template DNAa
10 pg - 1 µg
ddH2O
To 50 μl
2. 将PCR管置于冰上，并依次加入下列组分：
LinBioNote:（a）不同模板最佳反应浓度不同。对于50 µl反应体系推荐模板使用量：①质粒与噬菌体DNA为0.1-10 ng；②基因组DNA为0.1-1 µg。 ③cDNA为 1 - 5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)。
3. 用移液器轻轻吹打混匀，室温离心数秒，将液体离心至管底。
4. 使用下述推荐的热循环条件进行PCR：
Step
Temperature(°C)
Time
Number of cycles
预变性a
95℃
3 min
1 cycle
变性
95℃
15 sec
退火b
60℃
20 sec
30-35 cycle
延伸
72℃
60 sec/kb
终延伸
72℃
5-10 min
1 cycle
LinBioNote:（a）该预变性条件适用于绝大多数扩增反应，当模板结构复杂时，可将预变性时间延长至5 min；（b）退火温度需根据
引物的Tm值进行调整，当模板结构复杂时，可通过设置退火温度梯度PCR来确定引物与模板结合的最佳退火温度，并延长延伸时间来实现高效扩增。
注意事项
1. 使用本产品前，一定要完全融化，并上下轻轻颠倒混匀后才能使用，尽量避免起泡。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
常见问题及解决方法
Q1：如果存在非特异性扩增条带，可能的原因是？
a. DNA模板：（1）DNA起始量过多。可适当降低DNA起始量，减少非特异性PCR产物产生。（2）DNA的降解。通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。（3）模板具有复杂的序列（如，高GC含量或含二级结构）。调节退火温度和延长延伸时间来实现高效扩增。
b. 引物：（1）设计存在问题-特异性。使用在线引物设计工具，确保引物对目的片段具有特异性。（2）设计存在问题-引物二聚体。确保引物的3′末端不含互补序列或连续的G或C核苷酸，防止形成引物二聚体。（3）用量过多。引物浓度过高可能会加剧引物二聚体的形成。
c. 反应程序：(1) 变性不充分。当扩增富含GC的模板和具有二级结构的序列时，可增加变性时间和/或温度，使DNA有效解离。（2）退火温度过低。如果出现比目的条带小的杂带，则需升高退火温度，提高特异性。（3）退火时间过长。如果出现比目的条带大的杂带，则需缩短退火时间，尽量减少引物与非特异性序列的结合。
Q2：扩增得率低或者无扩增条带，可能的原因是？
a. DNA模板：（1）DNA起始量过少。适当增加起始量。（2）DNA的降解。通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。（3）模板具有复杂的序列（如，高GC含量或含二级结构）。调节退火温度和延长延伸时间来实现高效扩增。（4）DNA纯度低。存在抑制DNA聚合酶的物质，可使用70%乙醇洗涤DNA去除残留盐分等干扰物质。
b. 引物：（1）设计存在问题-特异性。使用在线引物设计工具，确保引物对目的片段具有特异性。（2）设计存在问题-引物二聚体。确保引物的3′末端不含互补序列或连续的G或C核苷酸，防止形成引物二聚体。（3）用量过少。引物用量范围通常为0.1–1 μM。（4）引物的降解。建议重新合成引物再进行扩增。
c. 反应程序：（1）变性不充分。当扩增富含GC的模板和具有二级结构的序列时，可增加变性时间或温度，使DNA有效解离。（2）退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，从而摸索反应的最佳的退火温度。
d. 其他原因：（1）反应体系配制时出现错误。建议重复实验。（2）试剂还未完全融化或未上下颠倒就开始使用。建议待试剂完全融化，并上下颠倒轻轻混匀后再进行使用。
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