LinBio REALscript RT Master Mix (+gDNA Remover)（带gDNA去除RNA逆转录试剂盒）
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本制品包含新一代逆转录酶REALscript H-RTase，具有较高的热稳定性和反转录效率，适用于cDNA合成后的两步法RT-PCR检测。RNA中残留的基因组DNA（gDNA）可作为PCR反应的模板被扩增，易导致实验结果的假阳性，本制品使用特殊的gDNA Remover，只需一步，向RT Master Mix中同时加入gDNA Remover、模板和水，15 min即可完成gDNA的清除和逆转录反应，同时避免了RNA的降解或样品损失，不影响后续的qPCR实验。本制品广泛适用于动物、植物以及微生物RNA的逆转录反应。
储存条件
-30 ~ -15℃避光保存，≤0℃运输，有效期12个月。 -
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产品组分
产品编号
产品名称
规格（100 rxns/20 µl reaction）
LN101201
规格（200 rxns/20 µl reaction）
LN101202
LN1012-A
gDNA Remover
100 μl
200 μl
LN1012-B
5×REAL RT Master Mix*
400 μl
800 μl
LN1012-C
Nuclease-free Water
2 ml
4 ml
*包含REALscript H-RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer等。
产品特点：
- 本试剂盒的5×REAL RT Master Mix含有逆转录反应所需的全部试剂，同时加入gDNA Remover、模板和水即可一次性完成gDNA的去除与第一链cDNA的合成。整个反应仅需15 min，高效快速，是两步法定量PCR反应的理想试剂。
- 本试剂盒中的逆转录酶RNase H活性缺失，具较高的热稳定性和反转录效率，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成。
- 本试剂盒具有优化的Random primers、Oligo dT Primer配比，充分保障反转录效率，以保证qPCR结果的真实性和可重复性。
注意事项
- 本品为由RNA制备cDNA的反转录试剂，在提取RNA和反转录过程中要严防RNase污染。建议佩戴好手套和口罩，
使用无RNase污染的实验耗材等。
- 建议所有操作均在冰上进行。
实验流程
第一链cDNA合成
- 反应体系（推荐冰上配置）
组分
使用量
Total RNA/mRNA
≤15 µL
5×REAL RT Master Mix
4 µL
gDNA Remover
1 µL
Nuclease-free Water
To 20 µL
注：
- 模板RNA、gDNA Remover 、5×REAL RT Master Mix在冰上解冻，建议先将除RNA外试剂配制成预混液，混匀，再加入RNA模板。
- Total RNA 建议不超过 2 μg，mRNA 不超过 200 ng (20 μl 体系)。
- 5×REAL RT Master Mix和gDNA Remover含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外，请点甩离心后使用，并避免吸头外壁沾附损失。
- 反应程序
温度
时间
42℃
15 min
85℃
5 sec
注：
- 如使用mRNA模板是来源于真核细胞（如人、小鼠的组织细胞）含有Poly(A)尾结构，42℃孵育15 min。
- 如使用mRNA模板是来源于原核细胞（细菌）或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25℃孵育10 min，42℃孵育15 min。
- 模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试先在42℃孵育2分钟，然后将反应温度提高至50℃~55℃孵育15min，有助于提高产量。
- cDNA 产物可直接用于 qPCR 反应。若不立即使用，建议-20℃或-80℃保存，请避免反复冻融。
定量PCR反应
上一步获得的cDNA产物可直接用于后续的定量RCR反应（cDNA使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10）。若荧光信号值不理想，建议对cDNA 原液进行5~10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20~30个循环为好。可搭配使用本公司的2×Universal SYBR Green qPCR Master Mix进行高性能基因表达分析。
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目录价：
¥0.00
