LinBio Cell/Tissue Total RNA Extraction Kit (细胞/组织总RNA提取试剂盒)
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产品简介
Linbio Cell/Tissue Total RNA Extraction Kit是一种即用快速型RNA抽提试剂盒，适用于动植物细胞、组织的RNA抽提。该产品相比于传统RNA提取试剂，柱式法RNA提取试剂盒具有快速、高效(完整性好，纯度、浓度高)、操作简便（全过程可在常温操作）、无需使用β-巯基乙醇和酚/氯仿等有毒有害试剂的特点，能在迅速裂解组织或细胞的同时抑制细胞释放出的核酸酶，保持RNA的完整性。试剂盒中DNA-Cleaning Column能够有效的吸附去除基因组DNA，RNA-Only Column能高效地结合RNA，提取的RNA无DNA与蛋白污染，可直接用于qPCR、Northern blot、dot blot、cDNA克隆、体外翻译等。
储存条件
室温（15-25℃）保存。 -
使用说明书：下载
组成成分
组分
LN101001
储存条件
Lysis Buffer
60 ml
15-25℃
Binding Buffer
18 ml
15-25℃
Wash Buffer I
56 ml
15-25℃
Wash Buffer II
32 ml
15-25℃
RNase-free Water
20 ml
15-25℃
RNA-Only Column
100套
15-25℃
DNA-Cleaning Column
100套
15-25℃
LinbioNote：Binding Buffer 、Wash Buffer I、Wash Buffer II在使用前需按标签提示加入相应量的无水乙醇。
使用说明
1. 细胞裂解或组织匀浆
a. 贴壁细胞：吸尽培养液，每1-5×106的细胞加入500 μl Lysis Buffer试剂，使用移液枪吹打，确保细胞全部重悬于Lysis Buffer，然后吸至离心管中，室温静置2min；
b. 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽上清，每1-5×106细胞加入500 μl Lysis Buffer，使用移液枪吹打，确保细胞全部重悬于Lysis Buffer中，室温静置2min；
c. 组织：（1）匀浆法：先将组织剪切成小块，每10-20mg组织加入500 μl Lysis Buffer后使用匀浆器进行匀浆处理，室温静置2min；（2）研磨法：使用液氮将组织进行速冻处理，随即迅速转移至研钵中，加入液氮后研磨，期间可不断加入液氮，直至研磨至粉末状（无明显可见颗粒），将研磨成粉的样品转移至离心管中，按10-20 mg组织加入500 μl Lysis Buffer试剂，室温静置2min。 LinbioNote：组织量不要超过 20 mg，否则可能会造成 DNA-Cleaning Column 发生堵柱现象，导致 RNA 的质量下降。
2. 将处理好的匀浆转移到DNA-Cleaning Column中，12,000 rpm室温离心1 min。弃掉gDNA-Filter Columns，将收集管中的滤液转移至新的1.5 ml离心管（RNase free）。
3. 向上述滤液中加入等体积 Binding buffer (使用前请确认已按照标签加入无水乙醇)，轻柔混匀。LinbioNote：若出现明显粘稠物或沉淀，用移液枪吹打多次，打散沉淀。
4. 将上述混合液转移至 RNA-Only Column 中，12,000 rpm室温离心 1 min，弃掉收集管中的废液。LinbioNote：吸附柱单次最大容量为 700 µl，如果溶液总体积超出 700 µl，可按上述步骤多次收集。
5. 向吸附柱中加入600 μl Wash Buffer I(使用前请确认已按照标签加入无水乙醇)，12,000 rpm室温离心1min，丢弃滤液。
6. 向吸附柱中加入650 μl Wash Buffer II(使用前请确认已按照标签加入无水乙醇)，12,000 rpm室温离心1min，丢弃滤液。
7. 重复第6步骤一次；
8. 将吸附柱放回收集管中，10,000 rpm室温离心2 min，去除吸附柱中残余的Wash Buffer II；
9. 将吸附柱放到一个新的1.5 ml收集管（RNase-free）中，向吸附柱中间位置滴加50-200 μl RNase-free Water，室温放置5 min，12,000 rpm，离心2 min收集RNA溶液。LinbioNote：为了提高RNA的回收量，可使用50-100 μl RNase-free Water再次洗脱离心柱。
注意事项
1. 所有离心管，枪头及相关溶液都必须无RNase污染，耐高温器物可150 ºC烘烤4 h以去除RNase，其它器物可用0.01 %的DEPC水浸泡过夜，灭菌后烘干。
2. 试剂盒使用前，请在Binding Buffer、Wash Buffer I、Wash Buffer II中添加无水乙醇，加入量请参照试剂瓶上标签。
3. 请检查试剂盒中的 Lysis Buffer和 Wash Buffe I是否有晶体析出现象，若低温存放后有晶体析出，可将 Buffer 放置于室温或 37℃一段时间，将晶体溶解后混匀再使用。
4. 样品处理量控制在10-20 mg组织或1-5 × 106 个细胞，样品量过多会导致基因组DNA残留或产量降低，并可能会导致DNA-Cleaning Column柱堵塞。
5. 操作过程中建议戴一次性口罩，勤换手套，以防RNase污染。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
常见问题及解决方法
Q1：RNA发生降解
a. 确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase污染。
b. 戴口罩和一次性手套，并在洁净区操作。
c. 针对内源RNase含量高或不易匀浆的组织，可将组织切成小块后立即投入液氮冷冻后进行研磨，整个研磨过程中，样品不得融化。
Q2: DNA-Cleaning Column发生堵塞
a. 减少样本的投入量。
b. 组织研磨或者匀浆不充分, 将裂解后的液体先进行12,000 rpm室温离心5 min，取上清转移至DNA-Cleaning Column，继续后续操作。
Q3: 提取不到RNA 或RNA产量低
a. DNA-Cleaning Column发生堵塞，导致 RNA 的质量下降。
b. 匀浆或者液氮研磨不充分。
c. 洗脱不充分。可加入大于50 μl 65℃预热的RNase-free water至膜中央，延长室温放置时间，离心后进行二次洗脱。
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