Linbio 去内毒素质粒 DNA 小提中量试剂盒
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本试剂盒采用改进的碱裂解法裂解细胞，结合 DNA 吸附柱选择性地吸附 DNA 的方法达到快速纯化质粒DNA 的目的。同时采用Buffer S3特殊配方有效去除内毒素。适合于从 5-15 ml 细菌培养物中提取多至 5~70 µg 高纯的质粒 DNA，可直接用于普通细胞转染、测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
储存条件
室温（15-30℃）干燥条件下，可保存18个月。若溶液产生沉淀，可在37℃温浴加热至沉淀完全溶解，不影响效果。
RNase A，-20℃保存，3-6个月内可2-8℃保存。 -
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产品信息
货号
名称
规格
LN101601
去内毒素质粒DNA 小提中量试剂盒
50次
LN101602
去内毒素质粒DNA 小提中量试剂盒
100次
产品组成
组分
50次
100次
储存条件
Buffer S1
25 ml
50 ml
15-30℃
Buffer S2
25 ml
50 ml
15-30℃
Buffer S3
25 ml
50 ml
15-30℃
Buffer W1
25 ml
50 ml
15-30℃
Buffer W2
22.5 ml
45 ml
15-30℃
RNase A（50 mg/ml）
60 µl
120 µl
-20℃；3-6个月内可2-8℃
Eluent A
15 ml
30 ml
15-30℃
纯化柱
50
100
15-30℃
2ml离心管
50
100
15-30℃
1.5ml离心管
50
100
15-30℃
储存条件
室温（15-30℃）干燥条件下，可保存18个月。若溶液产生沉淀，可在37℃温浴加热至沉淀完全溶解，不影响效果。
RNase A，-20℃保存，3-6个月内可2-8℃保存。
注意事项（请在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
- 第一次使用前将试剂盒中的RNase A全部加入到Buffer S1中，混匀，置于2~8℃储存。
- 第一次使用前请先在Buffer W2中加入无水乙醇，加入体积请参照试剂瓶上的标识。
- 使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，如出现沉淀应于37℃水浴中加热溶解后再使用。
操作步骤
- 取 5-15ml 在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12,000×g离心 1 min，弃尽上清。
- 加 500 μl Buffer S1 （请先检查是否已加入RNase A）悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
- 加 500 μl Buffer S2，温和并充分地上下翻转 6-8次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。此步骤不宜超过 5 min。
注意：避免剧烈摇晃，否则将导致基因组 DNA 的污染。此步骤不宜超过 5 min，以免质粒受到破坏。Buffer S2 使用后立即盖紧瓶盖，以免空气中CO2中和 Buffer S2 中的 NaOH，降低溶菌效率。
- 加500 μl Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合 6-8 次，12,000×g 离心 5-10 min。
注意：避免剧烈摇晃，否则将导致基因组 DNA 的污染。
- 将上一步骤的上清液转移至一新的离心管中，加入0.3倍体积的异丙醇，上下颠倒混匀后转移到DNA纯化柱。
注意：1）可选步骤：若有少量白色杂质，12,000×g 离心 1-3 min，弃沉淀。
2）DNA纯化柱的最大容积为700 µl，所以需要分次过柱。
6. 吸取步骤 5 中的混合液转移到纯化柱（置于 2 ml 离心管）中，12,000×g离心 1 min，弃滤液。
7. 将纯化柱置回2ml离心管，加 500 μl 蛋白洗涤液Buffer W1，12,000×g 离心 1 min，弃滤液。
8. 将纯化柱置回2ml离心管，加 700 μl 漂洗液Buffer W2（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000×g 离心 1 min，弃滤液。
9. 重复操作步骤7。
注意：两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。
10. 将纯化柱置回 2 ml 离心管中，12,000×g 离心 1 min。
11. 将吸附柱移入新的 1.5 ml 离心管中，在制备管膜中央加 60-80 μl Buffer Eluent 或者去离子水 ，室温静置1 min。12,000×g 离心 1 min。
注意：将洗脱液 Buffer Eluent 或去离子水加热至 65℃将提高洗脱效率。
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- 品牌
- 规格
