Linbio miRNA提取试剂盒

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产品信息

产品组成

注意事项

Buffer R1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

实验准备：

RNA提取的关键在于防止RNase污染。RNase在环境中普遍存在，且极为稳定，痕量 RNase即可迅速降解RNA，因此，需要做好防护措施。

1. 戴一次性干净手套；在单独洁净的区域操作；戴口罩并在操作过程中避免讲话。通过以上办法可有效防止实验者汗液、唾液中的RNase污染。

2. 使用RNase-free的实验器具，包括枪头和离心管。

3. 准备70%无水乙醇，-20℃预冷。

操作步骤

1. 样本处理：

1） 动物组织

a. 研磨法：

取低温冷冻或者新鲜组织20-40 mg，迅速转移至预冷的研钵中，用研磨杵研磨，直至研磨成粉末状。加入400ul Buffer R1，立即涡旋振荡，直至无粉末团块，转入1.5 ml离心管中。

b. 匀浆法

取新鲜组织20-40mg，加入400ul Buffer R1，立即用匀浆器进行匀浆，直至无明显组织块即可。

说明：RNA丰富的组织(如肝脏)不超过30mg；RNA含量低的组织(如肌肉) 不超过100mg；当使用的组织量小于20mg或者大于40mg时 Buffer R1，Buffer R2和异丙醇的使用量都减半或者按比例增加；

2）植物组织

去植物样本30-150mg至预冷的研钵中，用研磨杵研磨，直至成粉末状。加入400ul Buffer R1，立即涡旋振荡，直至无粉末团块，转入1.5 ml离心管中。

说明：植物叶子通常用量为10-80mg，小于30mg或者大于80mg时，R1,R2和异丙醇的使用量都减半或者按比例增加；

      植物纤维组织通常用量为100-150mg，大于150mg时，R1,R2和异丙醇的使用量按比例增加

3）细胞

a. 贴壁细胞：吸尽培养液，每10 cm²培养面积的细胞加入400ul Buffer R1试剂，使用移液枪吹打，确保细胞全部重悬于R1，然后吸至离心管中；

说明：建议6孔板每孔（表面积约为9.6 cm²）加400ul Buffer R1，12孔板每孔加200ul Buffer R1。

b. 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽上清，每2×10⁶至1.0×10⁷细胞加入400ul Buffer R1，使用移液枪吹打，确保细胞全部重悬于R1中；

说明：如遇某些细胞（如酵母和革兰氏阳性细菌）裂解不充分，可用匀浆器匀浆处理。

2. 加入150ul BufferR2，漩涡振荡15-30 s，4℃，12,000Xg离心5 min。

4.取上清至1.5ml离心管中，加入180ul无水乙醇，混和均匀。

5.将制备管置于2ml离心管(试剂盒内提供)中，转移步骤4中的混合液到制备管中，4℃，12,000Xg离心1 min。

6.弃制备管，在滤液中加入500 μl异丙醇，混和均匀。

7.12,000Xg离心10 min,弃上清。

8.加入700ul 70%乙醇(-20℃预冷)，12,000Xg离心5min.

9.弃上清,室温干燥5-10 min。

10.离心管中加入70 ul Buffer TE(nuclease-free)或RNase-free水洗脱miRNA。